Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到人躯内自身复合物到用到1标准型心血管疾病医学病征的方面所部在学龄前末期就有很好的说明了，多个人躯内自身复合物乙标准型肝炎的学龄前则有70%在血清转换后10年内入院心血管疾病，而随访15年的学龄前这一数目减少到84%。比起之下，占医学1标准型心血管疾病一半以上的标准型1标准型心血管疾病的中风的系统还没有得到充分的研究课题。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1标准型心血管疾病的方面：生殖在用到多种人躯内自身复合物时踏入第1阶段，用到血糖异常时踏入第2阶段，用到病征时踏入第3阶段。一些多发人躯内自身复合物乙标准型肝炎的生殖，在1期和2期，方面快速，并发展为中风的1标准型心血管疾病。我们以前说明了了一个大在首次检查到多种人躯内自身复合物结果推断后有数10年无心血管疾病的极慢方面者，这分组病征人数少，但相似性极为完全一致。随后，我们发现人躯内自身复合物特异性CD8+T终点站粒躯反应在方面加速的病征中的大体不共存，但在近期中风和长期以来共存的心血管疾病病征中的很容易检查到。这似乎证明，与方面病征比起，这些病征自身免疫反应的通气增强。

现代研究课题证明，尽管通气性T终点站粒躯(Treg)比例正常，但心血管疾病病征共存一些功用局限性，其中的包括对IL-2的反应战斗能力降低。此外，心血管疾病病征中的的现像CD4+T终点站粒躯似乎对通气突显抵抗性，展示出为现像T终点站粒躯的可抑制减慢，自然环境造成的Treg和躯外造成的其会Treg，以及复合物经历的CD4+T终点站粒躯中的IL-2反应减慢。本研究课题的目的是说明了了CD4+通气性T终点站粒躯(Treg)在海岸边极加速方面者中的的相似性，他们的平均年龄分组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以青年人基础上的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病征亲属中的检查1标准型心血管疾病的脆弱各种因素。我们以前说明了了长期以来加速方面者的相似性，他们保持良好多重人躯内自身复合物乙标准型肝炎超过10年，但没有用到心血管疾病的医学病征，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持良好无心血管疾病并愿意提供大量血液结果推断的加速方面者纳入T和B终点站粒躯功用统计分析。在在此以前的研究课题中的，8名慢方面者(SP分组)，中的位年龄分组43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的人躯内自身复合物乙标准型肝炎。所有的举例来说都处于1标准型心血管疾病方面的1期，尽管一些人随后失去了人躯内自身复合物对某些复合物的过敏原，然而，一名病征已经处于2期有数6年，但没有用到医学病征，一名病征被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验结果推断时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中的对该丝氨酸透过了单独分析。分立外周血单个氘终点站粒躯(PBMCs)，采用多给定流式终点站粒躯妖术和T终点站粒躯可抑制试验分析丝氨酸中的Treg的频所部、表标准型和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无都由聚类统计分析，分析Treg表标准型。

结果：与身心健康丝氨酸比起，来自慢方面躯的遗忘CD4+T终点站粒躯的都由聚类推断，激活的遗忘CD4+ Treg频所部减少，与免疫抑制其会的TNFR特别细胞内(GITR)传达减少有关。一名HbA1c升温的病征与方面加速者和归一化的相异分组比起，Treg曲谱有所不同。功用统计分析证明，与身心健康丝氨酸比起，来自加速方面躯的Treg抑制的CD4+现像T终点站粒躯可抑制显着受损。展示出为对现像CD4+T终点站粒躯CD25和CD134传达的可抑制减少。

上图1 深入的表标准型统计分析推断，CD4+Treg甲标准型在慢方面函数调用中的减少。由FlowSOM生成的Treg室，汇聚在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -终点站粒躯上。根据上标物传达鉴定出10个元簇:遗忘T终点站粒躯_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T终点站粒躯;HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒躯;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)采用9个不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个链表亦然一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在链表分组周围上色。每个链表中的的煎饼上图问到单个上标的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整躯而言上标传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)相对比例级为每个metacluster装终点站上图(比例级> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒躯(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T终点站粒躯(l)。粉红色橘色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频所部的减少是方面加速的logo。PG门控(a - f)和水果统计分析(g-k)比较SP举例来说和归一化的HD举例来说在CD4+CD45RA−T终点站粒躯上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的亦然性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达透过分立，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(白斑)分组以及丝氨酸SP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的频所部汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的装终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度上色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用相互间的不同。(j)装终点站上图推断了在SP(白斑)和HD(灰点)分组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对比例级(数目)。(k)直方上图推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上标相对传达与或多或少传达(粉红色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。或多或少与所有其他簇中的上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查

上图3 与身心健康献血者比起，方面加速者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T终点站粒躯元簇(遗忘T终点站粒躯_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T终点站粒躯;HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒躯;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达上标的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热上图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR传达相联，推断直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检查，p< 0.07(粉红色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(粉红色)丝氨酸SP 606和归一化的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)相联，推断直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检查

上图4 来自加速方面的CD4+ treg终点站粒躯控制现像CD4+T终点站粒躯的战斗能力降低。SP分组用粉红色的终点站和橘色问到，HD分组用金色的终点站和橘色问到，粉红色的终点站/橘色问到丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒躯透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按辨别的数目反应物。用抗CD3 /28微珠活化终点站粒躯，培植3过后透过流式终点站粒躯妖术检查。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培植(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制多于。采用乙标准型肝炎相异(激活的响应终点站粒躯不含treg)计算可抑制多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现像CD4+T终点站粒躯对加速方面的T终点站粒躯活化的可抑制更敏感。SP分组用粉红色的终点站和橘色问到，HD分组用金色的终点站和橘色问到，粉红色的终点站/橘色问到丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒躯透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按辨别的数目反应物。用抗CD3 /28微珠活化终点站粒躯，培植3过后透过流式终点站粒躯妖术(CD25反染)和终点站粒躯因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者一同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分所部(b)。(c,d) CD25可抑制百分所部(c)和CD134可抑制百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出结论的结论是，来自加速方面子的活化遗忘CD4+Treg在GITR传达中的得到了扩展和丰富，强调了有利于研究课题Treg在1标准型心血管疾病风险生殖中的的异质性的不足之处。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28